Стандартные процессы для реакции ПЦР

Стандартный процесс ПЦР состоит из трех этапов:

Денатурация ДНК: (90 ℃ -96 ℃): двухцепочечный шаблон ДНК подвергается расщеплению водородной связи под тепловым действием, образуя одноцепочечную ДНК

Отжиг: (60 ℃ -65 ℃): По мере снижения температуры системы праймер связывается с матрицей ДНК, образуя местную двойную нить.

Расширение: (70 ℃ -75 ℃): под действием фермента Taq (около 72 ℃, с наилучшей активностью) dNTP используется в качестве исходного материала, начиная от 3 'конца грунтовки в направлении 5 '→ 3 'конец, синтезировать нити ДНК, комплементарные шаблону.

После каждого цикла денатурации, отжига и расширения содержание ДНК удваивается. В настоящее время некоторые ПЦР могут реплицироваться за короткое время, даже если активность фермента Taq не является оптимальной из-за короткой области амплификации. Поэтому можно использовать двухступенчатый метод, который включает отжиг и растяжение одновременно между 60 ℃ и 65 ℃, чтобы уменьшить одно повышение температуры и уменьшить процесс и улучшить скорость реакции.

ПРЕВ: Для чего нужны наконечники для фильтрующих пипеток?

СЛЕДУЮЩИЙ: Автоматизация пипетки советы для рабочей станции Гамильтон